Бюджетное общеобразовательное учреждение «Вышне-Должанская основная общеобразовательная школа»
 
Фотографии

Гипертрофированный фолликул щитовидной железы что это такое


Гипертрофированные фолликулы щитовидной железы и их лечение - Вопрос эндокринологу

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту. Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях.

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 50 направлениям: аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гинеколога, гомеопата, дерматолога, детского гинеколога, детского невролога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, косметолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, педиатра, пластического хирурга, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, фитотерапевта, флеболога, хирурга, эндокринолога.

Мы отвечаем на 96.68% вопросов.

Оставайтесь с нами и будьте здоровы!

Причины, симптомы, лечение, диагностика и многое другое

Гипертиреоз - это заболевание щитовидной железы. Щитовидная железа - это небольшая железа в форме бабочки, расположенная в передней части шеи. Он производит тетрайодтиронин (T4) и трийодтиронин (T3), два основных гормона, которые контролируют использование энергии клетками. Ваша щитовидная железа регулирует ваш метаболизм за счет выделения этих гормонов.

Гипертиреоз возникает, когда щитовидная железа вырабатывает слишком много T4, T3 или обоих. Диагностика сверхактивной щитовидной железы и лечение основной причины могут облегчить симптомы и предотвратить осложнения.

Гипертиреоз может быть вызван множеством заболеваний. Болезнь Грейвса, аутоиммунное заболевание, является наиболее частой причиной гипертиреоза. Это заставляет антитела стимулировать выработку слишком большого количества гормона в щитовидной железе. Болезнь Грейвса чаще встречается у женщин, чем у мужчин. Он имеет тенденцию передаваться в семьях, что предполагает генетическую связь. Вы должны сообщить своему врачу, если у ваших родственников было это заболевание.

Другие причины гипертиреоза включают:

  • избыток йода, ключевой ингредиент тиреоидита Т4 и Т3
  • или воспаление щитовидной железы, которое вызывает утечку Т4 и Т3 из железы
  • опухоли яичников или яичек
  • доброкачественные опухоли щитовидной железы или гипофиза
  • большие количества тетрайодтиронина, принимаемые с пищевыми добавками или лекарствами

Высокое количество Т4, Т3 или обоих может вызвать чрезмерно высокий уровень метаболизма.Это называется гиперметаболическим состоянием. В гиперметаболическом состоянии у вас может наблюдаться учащенное сердцебиение, повышенное кровяное давление и тремор рук. Вы также можете сильно потеть и плохо переносить жару. Гипертиреоз может вызывать более частое опорожнение кишечника, потерю веса и, у женщин, нерегулярные менструальные циклы.

Видно, что сама щитовидная железа может раздуться в зоб, который может быть как симметричным, так и односторонним. Ваши глаза также могут казаться довольно заметными, что является признаком экзофтальма - состояния, связанного с болезнью Грейвса.

Другие симптомы гипертиреоза включают:

Следующие симптомы требуют немедленной медицинской помощи:

Гипертиреоз также может вызывать фибрилляцию предсердий - опасную аритмию, которая может привести к инсульту, а также застойной сердечной недостаточности.

Подробнее: Влияние фибрилляции предсердий на организм

Ваш первый шаг в диагностике - получить полную историю болезни и пройти физический осмотр. Это может выявить следующие общие признаки гипертиреоза:

  • потеря веса
  • учащенный пульс
  • повышенное артериальное давление
  • выпученные глаза
  • увеличенная щитовидная железа

Для дальнейшей оценки вашего диагноза могут быть выполнены другие тесты.К ним относятся:

Тест на холестерин

Вашему врачу может потребоваться проверить ваш уровень холестерина . Низкий уровень холестерина может быть признаком повышенной скорости обмена веществ, при которой ваше тело быстро сжигает холестерин.

T4, свободный T4, T3

Эти тесты определяют количество гормонов щитовидной железы (T4 и T3) в крови.

Тест уровня тиреотропного гормона

Тиреотропный гормон (ТТГ) - это гормон гипофиза, который стимулирует выработку гормонов щитовидной железой.Когда уровень гормонов щитовидной железы нормальный или высокий, ваш ТТГ должен быть ниже. Аномально низкий уровень ТТГ может быть первым признаком гипертиреоза.

Тест на триглицериды

Также можно проверить уровень триглицеридов. Как и низкий уровень холестерина, низкий уровень триглицеридов может быть признаком повышенной скорости метаболизма.

Сканирование и анализ щитовидной железы

Это позволяет вашему врачу определить, является ли ваша щитовидная железа сверхактивной. В частности, он может выявить, вызывает ли гиперактивность вся щитовидная железа или только одна область железы.

Ультразвук

Ультразвук позволяет измерить размер всей щитовидной железы, а также любые образования внутри нее. Врачи также могут использовать ультразвук, чтобы определить, является ли образование твердым или кистозным.

КТ или МРТ

КТ или МРТ могут показать, присутствует ли опухоль гипофиза, вызывающая заболевание.

Лекарства

Антитиреоидные препараты, такие как метимазол (тапазол), останавливают выработку гормонов щитовидной железой. Это обычное лечение.

Радиоактивный йод

Радиоактивный йод содержится в более чем 70 процентах U.S. взрослые с гипертиреозом, по данным Американской тироидной ассоциации. Он эффективно разрушает клетки, вырабатывающие гормоны.

Общие побочные эффекты включают сухость во рту, сухость глаз, боль в горле и изменение вкуса. В течение короткого времени после лечения может потребоваться принять меры предосторожности, чтобы предотвратить распространение радиации на других.

Хирургия

Часть или всю вашу щитовидную железу можно удалить хирургическим путем. Затем вам нужно будет принимать добавки с гормонами щитовидной железы, чтобы предотвратить гипотиреоз, который возникает, когда у вас недостаточно активная щитовидная железа, которая выделяет слишком мало гормонов.Кроме того, бета-адреноблокаторы, такие как пропранолол, могут помочь контролировать учащенный пульс, потоотделение, беспокойство и высокое кровяное давление. Большинство людей хорошо поддаются лечению.

Правильная диета с упором на кальций и натрий имеет важное значение, особенно для предотвращения гипертиреоза. Вместе с врачом разработайте рекомендации по правильному питанию, пищевым добавкам и упражнениям.

Гипертиреоз также может стать причиной ослабления и истончения костей, что может привести к остеопорозу.Прием добавок витамина D и кальция во время и после лечения может помочь укрепить ваши кости. Ваш врач может сказать вам, сколько витамина D и кальция нужно принимать каждый день. Узнайте больше о пользе для здоровья витамина D.

Ваш врач может направить вас к эндокринологу, который специализируется на лечении гормональных систем организма. Стресс или инфекции могут вызвать тиреоидный шторм. Тиреоидный шторм происходит, когда выделяется большое количество гормона щитовидной железы, что приводит к внезапному ухудшению симптомов.Лечение важно для предотвращения тиреотоксикоза, тиреотоксикоза и других осложнений.

Долгосрочная перспектива гипертиреоза зависит от его причины. Некоторые причины могут исчезнуть без лечения. Другие, например болезнь Грейвса, со временем ухудшаются без лечения. Осложнения болезни Грейвса могут быть опасными для жизни и влиять на качество вашей жизни в долгосрочной перспективе. Ранняя диагностика и лечение симптомов улучшают долгосрочную перспективу.

Q:

Почему мужчины реже, чем женщины, имеют проблемы с щитовидной железой?

A:

И гипертиреоз (сверхактивная щитовидная железа), и гипотиреоз (недостаточная активность щитовидной железы) обычно возникают в результате аутоиммунной реакции.В то время как болезнь Грейвса обычно вызывает гипертиреоз, болезнь Хашимото обычно вызывает гипотиреоз. Оба болезненных процесса запускаются организмом, атакующим щитовидную железу.

Не совсем понятно, почему у мужчин меньше аутоиммунных заболеваний, чем у женщин. Исследователи подозревают, что это связано с различиями в иммунной системе. Было обнаружено, что у женщин более интенсивный иммунный ответ на вакцинацию, травмы и инфекции, чем у мужчин. Поэтому вполне вероятно, что эта высокоактивная иммунная система подвергает женщин риску еще большего количества заболеваний щитовидной железы.

Judi Marcin, MD Ответы отражают мнение наших медицинских экспертов. Весь контент носит исключительно информационный характер и не может рассматриваться как медицинский совет. .

Гипертиреоз: причины, симптомы и лечение

Гипертиреоз или сверхактивная щитовидная железа возникает, когда щитовидная железа вырабатывает слишком много гормона щитовидной железы. Это оказывает влияние на все тело.

Щитовидная железа находится в области шеи. Имеет форму бабочки. Гормоны, которые он производит и выделяет в кровоток, контролируют рост и обмен веществ в организме. Слишком много гормона может повлиять на многие функции организма.

Существует несколько возможных причин и широкий спектр потенциальных симптомов.Обычно он начинается медленно, но у молодых людей начало может быть внезапным.

Гипертиреоз отличается от гипотиреоза. «Гипер» относится к наличию в организме слишком большого количества гормона щитовидной железы. «Гипо» означает слишком мало или недостаточную активность щитовидной железы.

Около 1,2 процента людей в Соединенных Штатах (США) имеют сверхактивную щитовидную железу.

Это поражает женщин больше, чем мужчин, и чаще всего возникает в возрасте старше 60 лет.

Без лечения гипертиреоз может серьезно повлиять на различные функции организма, в том числе на сердце.Однако лекарства обычно могут контролировать это, снижая выработку гормонов щитовидной железы.

Краткие сведения о гипертиреозе

Вот некоторые ключевые моменты о гипертиреозе. Более подробно в основной статье.

  • Гипертиреоз возникает, когда щитовидная железа вырабатывает слишком много гормонов.
  • Болезнь Грейвса является наиболее частой причиной.
  • Лекарства обычно могут нормализовать уровень гормонов, но лечение может занять от 1 до 2 лет.
  • При отсутствии лечения гипертиреоз может вызвать серьезные осложнения.
  • После лечения беременность должна протекать нормально.
Поделиться на Pinterest Щитовидная железа жизненно важна для регулирования гормонов в организме. Когда щитовидная железа производит слишком много гормонов, это называется гипертиреозом.

Симптомы разнообразны, и они различаются у разных людей. Пациенты с гипертиреозом легкой степени часто не подозревают о его наличии, потому что отсутствуют симптомы.

Большинство симптомов связано с увеличением скорости метаболизма.

К ним относятся:

  • отек на шее, вызванный увеличением щитовидной железы или зобом
  • нервозность, раздражительность, перепады настроения и снижение концентрации
  • диарея
  • затрудненное дыхание
  • усталость, усталость и проблемы со сном
  • мышечная слабость
  • гиперактивность
  • повышенная чувствительность к теплу, чрезмерному потоотделению и теплой влажной коже
  • повышенный аппетит
  • учащенное опорожнение кишечника и мочеиспускание
  • бесплодие и потеря интереса к сексу
  • кожный зуд с повышенными зудящими отеками ( крапивница)
  • ногти расшатываются
  • менструальные проблемы у женщин, особенно более легкие или отсутствие менструации
  • алопеция, при которой волосы выпадают пятнами
  • учащенное сердцебиение, иногда с учащенным сердцебиением
  • покраснение на ладонях
  • внезапная тяжесть потеря или прибыль
  • дрожащие руки и d шаткость

Симптомы у разных людей различаются, и у пациентов редко бывают все эти симптомы.

Пациенты с диабетом могут испытывать усиление симптомов диабета, таких как усталость и повышенная жажда.

Люди с сердечными заболеваниями имеют более высокий риск аритмии, сердечной недостаточности и других сердечно-сосудистых заболеваний.

Некоторые лекарства лечат симптомы гипертиреоза, такие как проблемы с сердцебиением, в то время как другие нацелены на выработку гормонов щитовидной железы.

Бета-адреноблокаторы могут облегчить симптомы до тех пор, пока не подействуют другие методы лечения. По данным Национального института диабета, болезней органов пищеварения и почек (NIDDK), большинство людей почувствуют себя лучше в течение нескольких часов.

Антитиреоидные препараты препятствуют выработке щитовидной железой слишком большого количества тироксина или трийодтиронина. Можно использовать метимазол или пропилтиоурацил (ПТУ).

После начала лечения может пройти несколько недель или месяцев, прежде чем уровень гормонов придет в норму. В среднем общее время лечения составляет от 1 до 2 лет, но это может занять больше времени.

Побочные эффекты лекарств включают:

  • аллергические реакции
  • снижение лейкоцитов, увеличение вероятности инфекций
  • редко, печеночная недостаточность

Радиоактивный йод улавливается активными клетками щитовидной железы, и это их уничтожает.Разрушение носит локальный характер и не вызывает побочных эффектов. Доза радиоактивности, содержащаяся в радиоактивном йоде, очень мала и не опасна.

Лечение радиоактивным йодом не подходит для беременных и кормящих женщин. Женщинам следует избегать беременности в течение как минимум 6 месяцев после лечения, а мужчинам не следует иметь ребенка как минимум 4 месяца.

Хирургия может удалить часть щитовидной железы, если другие методы лечения невозможны, например, во время беременности, если пациент не переносит другие методы лечения или болен раком.

Пациентам может быть полезно избегать пищи и других продуктов с высоким содержанием йода, таких как морские водоросли, некоторые лекарства от кашля и поливитамины.

Несколько факторов могут вызвать гипертиреоз.

Болезнь Грейвса

Это наиболее частая причина, на которую приходится более 70 процентов случаев. Это аутоиммунное заболевание.

Неясно, что вызывает болезнь Грейвса, но она часто передается в семье, что предполагает генетическую основу.

Болезнь Грейвса чаще всего встречается у женщин в возрасте от 20 до 40 лет и особенно у курящих.

Может поражать глаза, вызывая дискомфорт и двоение в глазах. У пациентов обычно выпячиваются глаза.

Узловая болезнь щитовидной железы

Шишки, известные как узелки, образуются в щитовидной железе. Непонятно, почему они развиваются. Они могут содержать патологическую ткань щитовидной железы, но обычно доброкачественные или доброкачественные. Они влияют на нормальную функцию щитовидной железы, вызывая ее сверхактивную.

Щитовидная железа может увеличиться, но боли нет. Кто-то с узелками может нащупать их кончиками пальцев.

Чрезмерное потребление йода

Щитовидная железа удаляет йод из крови. Йод поступает из таких продуктов, как морепродукты, хлеб и соль. Щитовидная железа использует йод для производства гормонов щитовидной железы.

Два самых важных гормона щитовидной железы - это тироксин (Т4) и трийодтиронин (Т3).

Прием дополнительных добавок йода в пищу может вызвать выработку слишком большого количества гормонов щитовидной железой.

Прием гормонов щитовидной железы: Пациенты, получающие гормоны щитовидной железы в качестве лечения, должны регулярно наблюдаться у своего врача, чтобы убедиться, что они принимают правильную дозу лекарств для щитовидной железы.

Лекарства

Некоторые лекарства, используемые при лечении сердечных заболеваний, содержат большое количество йода. Они могут вызвать изменения в функции щитовидной железы. Варианты включают амиодарон и литий, используемые для лечения биполярного расстройства.

Тиреоидит

Воспаление щитовидной железы, которое часто возникает в результате вирусной инфекции. Симптомы включают жар, боль в горле, болезненное глотание, генерализованные боли и боли в шее.

Фолликулярный рак щитовидной железы

В редких случаях сверхактивная щитовидная железа может быть вызвана раком щитовидной железы.Злокачественные клетки могут начать вырабатывать тироксин или трийодтиронин.

Не существует специальной диеты, которая могла бы вылечить заболевание щитовидной железы.

Тем не менее, сокращение чрезмерного потребления йода в рационе и отказ от йодных добавок могут помочь предотвратить нарушение баланса активности щитовидной железы.

Сбалансированная диета может помочь сохранить здоровье щитовидной железы. Если вы решите принимать добавки, не забудьте посоветоваться с врачом о том, сколько их принимать и какие добавки будут лучше всего для вас, не влияя на активность щитовидной железы.

Офтальмопатия Грейвса может вызывать боль или дискомфорт в глазах, светочувствительность и некоторые проблемы со зрением. Глаза могут высовываться.

Использование глазных капель и ношение солнцезащитных очков могут облегчить симптомы.

В тяжелых случаях лечение некоторыми лекарствами, такими как стероиды или иммунодепрессанты, может уменьшить отек за глазами.

Ураган щитовидной железы - это необычная реакция, которая может быть вызвана инфекцией, травмой или травмой, включая хирургическое вмешательство, или родами.Это также может произойти у беременных женщин с невыявленным или плохо контролируемым гипертиреозом.

Признаки и симптомы включают учащенное сердцебиение, высокую температуру, возбуждение, желтуху, рвоту, диарею, обезвоживание и галлюцинации.

Это опасная для жизни реакция. Требуется неотложная медицинская помощь.

Тяжесть гипертиреоза и его симптомы зависят от того, насколько хорошо организм способен реагировать на изменения, вызванные избытком гормонов щитовидной железы, и насколько хорошо пациенты следуют своему плану лечения.

Врач спросит о симптомах, проведет физический осмотр и, возможно, назначит анализы крови.

Расширенный гипертиреоз обычно легко диагностировать, потому что признаки ясны, но диагноз менее очевиден на ранних стадиях.

Анализ крови, известный как тест функции щитовидной железы, может показать, насколько хорошо работает щитовидная железа. Тест проверяет уровни тиреотропного гормона (ТТГ), тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3).

Может проводиться специальное диагностическое сканирование щитовидной железы с использованием радиоактивного йода для определения функции щитовидной железы.Это известно как тест на поглощение радиоактивного йода (RAIU).

Поделиться на PinterestЖенщинам с гиперактивной щитовидной железой, которые хотят забеременеть, следует сначала обратиться за лечением от гипертиреоза.

Женщине с гипотиреозом может быть труднее забеременеть.

Во время беременности уровень гормонов щитовидной железы немного повышается.

Женщины с гиперактивной щитовидной железой могут обнаружить, что их щитовидная железа немного увеличена во время беременности. У некоторых восприимчивых женщин, которым ранее не был поставлен диагноз, может быть слегка гиперактивная щитовидная железа во время беременности.

Тяжелый нелеченый гипертиреоз во время беременности был связан с самопроизвольным абортом, низкой массой тела при рождении, высоким кровяным давлением у матери и проблемами с сердцем.

Если у матери проблемы с щитовидной железой, у новорожденного следует проверить функцию щитовидной железы, так как это может оказать сильное влияние на развитие мозга.

Женщины, получающие лечение до беременности, будут продолжать получать ту же терапию, но их лечение может нуждаться в корректировке, поскольку потребности в дозах тироксина обычно увеличиваются.Левотироксин безопасно принимать во время беременности, так как он имеет те же характеристики, что и природный гормон.

Тем не менее, его следует принимать за 2-3 часа до приема любых пренатальных витаминов, поскольку железо и кальций могут препятствовать абсорбции гормона щитовидной железы.

Женщина должна убедиться, что ее гипертиреоз находится под контролем, прежде чем забеременеть.

При соответствующем лечении можно ожидать нормального развития беременности.

.

Культура щитовидной железы от монослоя до закрытых фолликулов

Большая часть первых работ по культивированию фолликулов крыс была открыта и стала дезорганизованной в первые дни культивирования [16,23,72]. Мы основали наш подход на этих методах диссоциации щитовидной железы крыс. Мы описываем важность выделения закрытых фолликулов, их культивирование и долгосрочную реакцию на ТТГ и йодид (9 и 12 дней), а также на возрастающие дозы йодида. Подробно описаны методология выделения, морфологическое исследование этих изолированных фолликулов и в культуре на морфологическом уровне с помощью инвертированного (IM) оптического (OM), электронного (TEM) и (CM) конфокального микроскопа и их функциональное исследование: накопление и организация йодида. , Tg, T 3, T 4 синтез и локализация NIS.

4.1. Выделение и закрытая культура фолликулов.

Использовали щитовидную железу крыс Wistar (200 г) и мышей ICR (30 г); животные были получены из биотериума Национального университета Колумбии. Свинья Cialta и щитовидная железа штамма 769 были предоставлены двумя бойнями в Боготе. Некоторые имеют субклинический гипертиреоз из-за инъекции β-энергии, имеющие T 3 (1,34 нг / дл) и T 4 (107,0 нг / дл) в пределах нормального диапазона и чрезмерно низкий уровень ТТГ (<0,005 мМЕ / мл) , были названы гипотиреозами, как морфологически и функционально описаны у мышей [33], в то время как другие были названы эутиреоидными.С животными обращались в соответствии с колумбийскими соображениями в отношении животных, используемых для исследований и ухода за животными для домашнего потребления.

Методология в основном касалась щитовидной железы крыс и была подтверждена на щитовидной железе мышей. Получить фрагменты щитовидной железы человека сложно; Таким образом, свинья использовалась из-за ее сходства с метаболизмом человека [82,83,84,85,86], хотя есть надежда начать культивирование щитовидной железы человека в ближайшем будущем. Приходилось учитывать различия между грызунами и свиньями.Общий обмен веществ, регулируемый щитовидной железой, у грызунов в 10 раз выше, чем у свиней и человека. Диаметр фолликула колеблется от 50 до 150 мкм у грызунов, в то время как у свиней и людей он составляет от 150 до 500 мкм. Доли грызунов варьируются от 3 до 5 мм. 3 в самом широком месте, тогда как у свиней и людей - от 3 до 5 см. 3 , что означает, что для каждого эксперимента необходимо приносить в жертву много грызунов; Используется от 30% до 40% доли свиньи. Капсула грызунов тонкая, паренхима не имеет большого количества соединительной ткани; у свиней эта капсула толстая, а соединительнотканные перегородки очень многочисленны и обширны.Бритвенные станки используются для стереоскопического микродиссекции. Капсула из долей крысы и мышей удаляется; каждый разрезан пополам вдоль его главной оси, в то время как мочки свиньи вскрываются пополам с помощью скальпеля и разрезаются на фрагменты от 7 до 10 мм 3 . Затем соединительная ткань удаляется, насколько это возможно, с помощью стереоскопического микродиссекции бритвой, не затрагивая паренхиму. Получены фрагменты размером около 3 мм. 3 (аналогично фрагментам грызунов) без соединительной ткани, видимой в стереоскоп.

Фрагменты щитовидной железы объединяют и промывают 3 раза средой COON [55], ферментативно диссоциируют с коллагеназой II, которая переваривает коллаген (250 Ед / мл грызунов; 400 Ед / мл свиньи) и 2 мкг / мл ДНКазы 1 (nb, исходная статья [82] гласила «2 мг / мл ДНКазы I», хотя должно было быть 2 мкг / мл). Мертвые клетки образуют агрегаты, которых можно избежать с помощью ДНКазы, которая переваривает и фрагментирует только ДНК мертвых клеток; живые клетки или фрагменты фолликулов присоединяются к этим агрегатам, если не добавляется ДНКаза [23].

Фрагменты щитовидной железы диссоциируют в растворе фермента в среде COON при 37ºC и встряхивании со скоростью 140 колебаний в минуту; без промедления они механически диссоциируют в этом растворе, отсасывая и вытесняя раствор фермента, содержащий фрагменты щитовидной железы, с помощью пипеток на 20 мл (от 3 до 5 мм дистальный диаметр; крайний для входа и выхода жидкости из пипеток) 10 раз. Техника с фрагментами грызунов продолжается 10 раз пипетками на 10 мл (дистальный диаметр 1,5 мм). Такая диссоциация пипетки выполняется с 10-минутными интервалами во время диссоциации фермента (т.е.е. супернатант, содержащий изолированные фолликулы, собирают каждые 10 минут после диссоциации пипетки и добавления свежего раствора фермента в течение следующих 10 минут). Это делается трижды по 10 мин для щитовидной железы грызунов и 6 раз по 10 мин для щитовидной железы свиньи; это модификация уже описанной диссоциации [16,23,72] и наиболее важна для предотвращения раскрытия фолликула. Большинство фолликулов изолируются во время второй диссоциации у крыс и мышей и во время третьей и четвертой диссоциации свиней.

Фолликулы, выделенные в течение каждого 10-минутного интервала, промывают 3 раза COON + 2% фетальной телячьей сыворотки (FCS), центрифугированной при 50 г для фолликулов грызунов и 30 г для фолликулов свиньи.Это необходимо делать в центрифуге со свободным ротором, используя низкую центробежную силу, иначе центробежное давление открывает множество фолликулов. Все фолликулы помещают вместе и фильтруют через сетку с диаметром пор 100 мкм для грызунов; для свиней оставляют декантировать при 1 г в течение 10 мин. Время предварительной инкубации или восстановления диссоциации продолжается в течение 4 часов для крыс и мышей и 12 часов для свиней в среде COON + 0,5% FCS в атмосфере 95% воздуха - 5% CO 2 атмосферы и 100% влажности на 1% агарозе. I (меньшая группировка, чем с агарозой типа II), чтобы клетки не прилипали к опоре [44,75].Питательную среду (такую ​​же, как при предварительной инкубации) заменяют на аспирацию с фолликулами; он прядется с массой 50 г для грызунов и 30 г для свиней. Супернатант снимают и добавляют свежую среду, чтобы начать культивирование в тех же условиях окружающей среды и на агарозе I типа; то же самое делается для смены среды при создании культуры.

Недиссоциированные фрагменты (около 0,8 мм. 3 ), оставшиеся после диссоциации фермента, промывают 3 раза COON + 2% FCS и культивируют в тех же условиях, что и для фолликулов, но с 2% FCS.Согласно Бауэру и Херцогу [43], это было названо культурой мини-органов.

Были опробованы различные опоры для поддержания структуры фолликулов, такие как стекло, пластик, коллаген или покрытый коллагеном (1 мг / мл), и при концентрации FCS 1%, 5% и 10%. Закрытые фолликулы сохраняются в культуре; однако монослои тироцитов растут пропорционально концентрации сыворотки в среде. Следует избегать роста монослоя, потому что это увеличивает значения накопления йодида и мешает анализу функции органификации йодида; диссоциация свежих ферментов должна быть проведена для восстановления фолликулов [82,86].Когда фрагменты фолликулярных клеток культивируются в коллагене, они не реформируют фолликулы, как было описано для тироцитов человека [79,80] и мыши [78]; некоторые эпителиальные клетки MDKC организованы в фолликулоподобные структуры, требующие HGF [81]. Вышесказанное означало, что использование стекла, пластика и коллагена для культивирования фолликулов было отклонено и вместо них использовалась агароза типа I.

Функциональное и морфологическое состояние фолликулов контролировалось перед началом культивирования с помощью 5% теста исключения трипанового синего [87], жизнеспособность клеток определялась методом IM, что также позволяло визуализировать открытую или закрытую архитектуру фолликула.Жизнеспособность тироцитов обычно составляет около 100% сразу после выделения и до начала преинкубации. Клетки, которые не исключают трипановый синий, обычно представляют собой клетки эндотелия, связанные с периферией фолликула (сплошные черные стрелки на рисунке 3B) или тироциты, агрегированные фрагментом фолликула (круг на рисунке 3B).

Определяется накопление и организация йодида (5 мкКи / мл Na 125 I, 4 ч) для обеспечения высокого процента закрытых фолликулов; важность этого контроля перед началом культивирования описана и обсуждается 125 I в 6.1. Важность получения закрытых фолликулов.

Фолликулы культивируются в течение 0, 1, 3, 6, 9 и 12 дней с ТТГ и без ТТГ (1 и 0,1 мЕд / мл крысы; 1 мЕд / мл свиньи) в тех же условиях, что и для предварительной инкубации. Культуральную среду меняют в течение этих дней, отсасывая ее вместе с фолликулами и вращая при 50 г для крысы и 30 г для свиней, отбрасывая супернатант, который обычно содержит фрагменты клеток и фолликулов. Фолликулы исследуются IM на каждом этапе. 5 мкКи / мл Na 125 I добавляют каждый день культивирования за 4 часа до сбора фолликулов для морфологических и функциональных исследований.

Фолликулы культивируют в течение 1 дня с ТТГ и без него (0,1 мЕд / мл крысы; 1 мЕд / мл свиньи) для изучения влияния различных концентраций йодида. Среду заменяют, и фолликулы культивируют в течение 0,5, 3, 8, 12, 24 и 48 часов с 10E-10, 10E-7, 10E-5, 10E-3 M Na 127 I и Na 125 I 5 мкКи / мл (любезно предоставлено Мануэлем Е. Патарройо) с ТТГ и без него. После такого лечения фолликулы собирают для морфологического и функционального анализа.

4.2. Морфологические исследования

Морфологическое исследование включает пропитку фолликулов смолой Epon; фолликулы прядут при 300 г для дегидратации перед пропиткой смолой [23,82,83]. Полутонкие, авторадиографические срезы наблюдаются с помощью ОМ, а ультратонкие срезы - с помощью ПЭМ.

Синтез белка и экспрессия NIS снижают избыток йодида [30,31,32] и (учитывая, что NIS не описан в закрытых культурах фолликулов) присутствие NIS определяется в культуре в присутствии различных концентраций йодида и ТТГ , с антителами против NIS / GS (1: 500, любезно предоставлены Thierry Pourcher) и вторичными антителами против кроликов Alexa 488 (1: 1000).Ядра визуализируются с помощью DAPI / PBS (1: 9000). Фолликулы сдавлены на коммерческих пластинах, поскольку их диаметр больше диаметра клеток; была сконструирована камера высотой 1 мм, чтобы можно было наблюдать с помощью КМ без сжатия фолликулов.

4.3. Функциональные исследования

Организация йода (который важен для синтеза гормонов щитовидной железы) теряется в первые дни в моделях культур щитовидной железы, описанных к настоящему времени. Функциональный анализ фолликулов в культуре для определения того, сохраняется ли структура фолликулов, имеет преимущества перед другими культурами в отношении синтеза гормонов.

Накопление и организация фолликулов 125 I - радиационная способность определяется с помощью счетчика гамма-лунок. Фолликулы крысы промывают 3 раза в течение 5 минут при 50 г и 30 г для фолликулов свиньи COON + Na 127 I (холодный), в 100 раз превышающей концентрацию радиоактивного йодида, используемого в культуре, и радиоактивность, возникающую в результате накопления (A) определяется. 10% трихлоруксусная кислота + Na 127 I Затем добавляют 100-кратную концентрацию радиоактивного йодида, используемого в культуре, и определяют радиоактивность, присутствующую в осадке белка, соответствующую связывающему белок йодиду (PBI) или йодидной организации (O).

Осадок используется для определения количества ДНК дифениламиновым методом [88], Tg19S методом ВЭЖХ и йод-тиронина (MIT, DIT, T 3 , rT 3 и T 4 ) в Tg обратным методом. -фазная ВЭЖХ [89]. Результаты выражены в% дозы йодида в мкг ДНК. Структура фолликула не позволяет подсчитать количество клеток, а статистический анализ требует наличия параметра, позволяющего гомогенизировать результаты; исходя из того, что 1 пг ДНК / мл соответствует клеткам 2E5, можно определить количество клеток, присутствующих в культурах, и статистически сопоставить результаты [82].

.

Смотрите также